病理切片技巧

病理切片技巧

       一、組織固定

       固定是指將各種組織浸入防腐劑內，使細胞內的物質為不溶性。固定組織的目的是設法得到接近正常生命狀態的細胞結構。有人說“形態學的美是良好固定產物”，這說明固定

的特殊重要作用。

      二、固定目的

       1.抑制自溶和腐?。?/strong>新鮮組織如果不經固定，任意放置細胞內酶對蛋白質的分解，以及細胞孳生，則易因細菌繁殖而致組織腐爛。細胞內的蛋白質分解酶將蛋白質分解為氨基酸

后脫離細胞而引起組織的自溶。

       2.保存：細胞經過固定，不但可以防止自溶和細菌性腐敗，而且能沉淀或凝固組織內的各種成份和病理代謝產物，如蛋白質、脂及脂蛋白、脂肪、糖類、色素，其它碳水化合物、

無機鹽成份、微生物等都可以經過固定而保存下來，并在制片過程中不為其他試劑溶解破壞。

       3.硬化：固定劑的硬化作用能使柔軟組織（如腦）的質地變硬而易于操作。

       4.膠質物體的固化：固定能使細胞正常的半液體狀（溶膠）變為不能逆轉的固體狀（凝膠）粘度。

        5.肉眼鑒別：固定可將各種細胞和組織成分的折光率作不同程度的改變，增強組織的折光指數，固定時更容易辨認。

      6.對染色的影響：某些固定劑尚具有一定的媒染作用而增進染色（如苦味酸對于染色的媒染作用）可使細胞各種部位易于著色，所以組織固定后有利于制片染色和在顯微鏡下的

觀察。

       7.滲透和固定：固定還可以使組織和細胞的各種滲透壓不再發生改變，在制片時就能在最大范圍內保持組織和細胞的原來形態。

       三、固定的方法及注意事項

       1.合適容器：一般容器的容積是組織的10-15倍以上。

      2.充足時間：組織越大越厚，固定時間應越長，反之。一般4-12小時或更長。

       3.足量的固定液：應該使用足量的固定液，一般應為組織體積5-10倍，最少不應于五倍。不要先將標本塊放入容器后再注入固定液，以免標本貼付于器皿。

      四、石蠟切片常規操作

        切片前準備：攤片機溫度設置在 45-50℃，切 片容易展開，蠟不會快速溶解 散開為宜；烤片機溫度設置在 70℃左右，固定切片機刀座、安 裝刀片，注意檢查切片角度、 切片

厚度。

       蠟塊冷凍：蠟塊冷凍溫度不宜過低，并不是冷凍越低越好。

      修片與切片：粗修組織注意組織的切面與層次，保證組織完整性；粗修注意修片厚度與修片速度，避免粗修造成組織撕裂與崩缺； 切片前注意細修切片，去除粗修時造成的組

織裂隙；切片厚度一般為 4μm，淋巴結 2-3μm， 腎穿與骨髓穿刺組織 1-2μm， 腦組織 4-5μm；切片時注意速度適中，過慢與過快易造成切片厚薄不均或切片厚度不準；切片要

求完整、均勻、厚度適宜。

       展片與撈片：烤片前注意瀝干切片上的水分；烤片溫度不宜過高，溫度高于蠟熔點的 5-10℃，時間以烤干水分為宜。

       切片結束：卸下刀片，清潔切片機、設備 切片結束儀器與操作臺面；整理蠟塊、 切片染色。

       五、切片常見問題分析

       1、切片太厚

       2、切片空洞

       3、切片刀痕

       4、切片太顫抖

      5、切片褶皺

       6、跳片

       六、注意事項

       1、批量修片，認真仔細粗修、細修，防止組織從包埋盒上脫落。

       2、不要使用硬的物體接觸刀片，如鑷子，刷子。

       3、切片刀刃傾斜過大或過小都不能正常進行切片。

       4、有系統的使用刀片，從一邊順序使用到另外一邊。

       5、精準的刀架側向移動功能,確保刀片全長使用。

       6、確保蠟塊的溫度是冷的，或者使用冷臺, 防止過度冷凍組織塊。

       7、高質量的刀片，并且注意定期更換刀片，操作人員良好的使用習慣能確保刀片最長使用壽命。