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實時熒光定量PCR一、簡介PCR（聚合酶鏈式反應）技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于 與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性→退火→延伸三個基本反應步驟構成：①模板DNA的變性；②模板DNA與引物的退火（復性）；③引物的延伸。二、操作步驟（Trizol提取法）1. RNA提取a. 取細胞棄去培養基，用1×PBS洗兩遍加入1 mL Trizol吸打混勻后，室溫放置5...
2023-12-21
Western Blot小分子蛋白攻略一、樣品制備 在細胞和組織裂解時，通常會將核酸的大分子可能會包裹一部分小分子蛋白進入沉淀而造成樣品中的小分子蛋白損失。因此我們在提取蛋白時在裂解液里加入核酸酶能有效的降解核酸從而減少蛋白沉淀丟失。二、SDS-PAGE電泳分離膠的使用及濃度 有這么個說法小分子量蛋白容易在電泳過程中彌散，電泳在縮濃膠里多壓一會，在分離膠里面跑一半就可...
2023-12-12
小鼠TNF - α 未包被酶聯免疫吸附測定法 賽默飛未包被ELISA 貨號88-7324 本小鼠TNF - α非包被酶聯免疫吸附試驗(ELISA)包含進行定量酶聯免疫吸附試驗(ELISA)所需的試劑、標準物、緩沖液和稀釋劑。該ELISA試劑盒是專門設計的，用于精確地測量小鼠血清、血漿、組織勻漿、灌洗液和細胞培養上清等樣本中的TNF - α蛋白水平。 ...
2023-12-02
穩定轉染（Stable transfected）：外源DNA既可以整合到宿主細胞中，也可能作為一種游離體（episome）存在。 盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉染細胞能整合，通常需要通過一些選擇性標記。如來氨丙基轉移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素磷酸轉移酶（HPH），...
2023-11-17
流式細胞術細胞周期實驗 一、簡介 細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應細胞增殖速度。碘化丙啶(Propidium iodide, PI)可插入堿基之間而與 DNA 結合，其對堿基幾乎沒有序列編好，每 4 - 5 個堿基對可結合一個染料分子。PI 也能與 RNA 結合，需要用核酸酶處理來區分 RNA 和 DNA ...
2023-11-02
惡性腫瘤向鄰近的組織侵犯稱為侵襲。檢測腫瘤侵襲能力判斷腫瘤轉移能力的一種方法。原理是Transwell小室置于24孔的培養板中，分為上下室,上室底部為-層聚碳酸酯膜，這層膜具有通透性，將上室培養液和含下室培養液隔開，但是腫瘤細胞可以通過，下室中的培養液(如血清中的趨化因子)可以吸引上室中的細胞。
二、操作步驟
1、遷移...
二、操作步驟
1、遷移...
2023-10-21
Western Blot磷酸化蛋白攻略一、簡介 細胞利用蛋白質的選擇性磷酸化作用來調整細胞內諸多的生理加工過程。在靶蛋白的特定氨基酸序列模體上，蛋白激酶可將磷酸基偶聯在酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸的殘基上。該過程又可通過蛋白質磷酸酯酶逆轉。蛋白激酶和蛋白磷酸酶可識別特定的模體和特定的蛋白質從而決定了其功能的特異性。大約10%或更多的蛋白質的磷酸化受到位點特異性調控細胞的調控可以開啟或調...
2023-08-09
Western Blot大分子蛋白攻略一、樣品制備 大分子量蛋白不好提取，因為很多大分子量蛋白是膜蛋白，膜蛋白屬于非可溶性蛋白，且表達量通常較低，一般使用溶液法（RIPA等）裂解時，通常會丟失在不可溶組分中，所以要選擇合適的方法來進行蛋白的提取或富集。提取總蛋白時建議適當延長裂解時間，有助于大分子量蛋白的充分裂解。二、SDS-PAGE電泳分離膠的使用及濃度 凝膠主要有...
2023-08-01
一、簡介蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot，簡稱WB。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色，通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。Western Blot 印跡常用的轉移膜主要是硝酸纖維素膜(NitrocelluloseBlotting M...
2023-07-22
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